激光光學顯微鏡的組成、使用領域及優(yōu)點說明

激光光學顯微鏡主要組成：

（1）物鏡物鏡是決定顯微鏡性能的最重要部件，安裝在物鏡轉換器上，接近被觀察的物體，故叫做物鏡或接物鏡。物鏡的放大倍數與其長度成正比。物鏡放大倍數越大，物鏡越長。

（2）目鏡因為它靠近觀察者的眼睛，因此也叫接目鏡。安裝在鏡筒的上端。

（3）聚光器：聚光器也叫集光器。位于標本下方的聚光器支架上。它主要由聚光鏡和可變光闌組成。其中，聚光鏡可分為明視場聚光鏡（普通顯微鏡配置）和暗視場聚光鏡。

（4）反光鏡：反光鏡是一個可以隨意轉動的雙面鏡，直徑為50mm，一面為平面，一面為凹面，其作用是將從任何方向射來的光線經通光孔反射上來。平面鏡反射光線的能力較弱，是在光線較強時使用，凹面鏡反射光線的能力較強，是在光線較弱時使用。

（5）照明光源：顯微鏡的照明可以用天然光源或人工光源

（6）濾光器：安裝在光源和聚光器之間。作用是讓所選擇的某一波段的光線通過，而吸收掉其他的光線，即為了改變光線的光譜成分或削弱光的強度。分為兩大類：濾光片和液體濾光器。

（7）蓋玻片和載玻片：蓋玻片和載玻片的表面應相當平坦，無氣泡，無劃痕。最好選用無色，透明度好的，使用前應洗凈。蓋玻片的標準厚度是0.17±0.02mm，如不用蓋玻片或蓋玻片厚度不合適，都會影響成像質量。載玻片的標準厚度是1.1±0.04mm，一般可用范圍是1—1.2mm，若太厚會影響聚光器效能，太薄則容易破裂。

激光顯微鏡的使用領域

（1）共聚焦及雙光子在現代生物學研究中有如下應用：

（2）多色熒光成像(Multi-color imaging)，具有多磁道和雙向掃描，曲線掃描等特性。

（3）三維重構（Three dimentional reconstruction）及定量分析。

（4）實時成像（Time series,real time imaging），可進行活細胞跟蹤。

（5）離子成像（Ion imaging）/比率成像（Ratio imaging），可進行Ca2+,Mg2+,H+,Na+,K+,Zn2+,Ni2+,Fe2+,Hg2+,Pb2+及Cd2+等成像。

（6）熒光原位雜交（FISH:fluorescence in situ hybridization）；

（7）熒光漂白恢復（FRAP：fluorescence recovery after photobleaching）；

（8）熒光共振能量轉移（FRETM:fluorescence resonance energy transfer；

（9）光生命期成像顯微術（FLIM:fluorescence lifetime imaging microscopy）。

（10）熒光相關光譜（FCS:fluorescence correlation spectroscopy）。

激光顯微鏡的優(yōu)點

（1）熒光標記的特異性及可定量性。

（2）共聚焦針孔的運用，有效的消除了焦平面上下散射光，提高軸向分辨率。

（3）點光源激光的應用，對熒光素能達到有效的激發(fā)，激發(fā)的特異性高，降低對熒光的淬滅，增強側向分辨率。

（4）雙光子的應用，相對較低平均功率的紅外激發(fā)，大大減低對活細胞的損傷；熒光激發(fā)高度聚焦在焦點處，可避免了焦點以外的光漂白（Photobleaching）和光毒（cytotoxicity）作用，延長觀察時間，是目前用于活細胞跟蹤的最理想方法。

（5）脈沖激光散射和吸收程度小，透射性強，對厚樣品的穿透可達400um，是對厚的組織分析的最首先方法。

（6）結合META新技術，尤其對熒光蛋白成像具有更方便，更精確的效果。